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Transwell細胞培養(yǎng)設(shè)計

實驗一:探究共培養(yǎng)條件分泌組是否有變化即細胞A和細胞B在共培養(yǎng)條件下其各自分泌組是否受到影響(暫且不討論誰對誰的影響)。
設(shè)計實驗:
1.使用Transwell培養(yǎng)技術(shù),上層培養(yǎng)細胞A(細胞數(shù)設(shè)置為1*10^5個 <舉例>)下層培養(yǎng)細胞B(細胞數(shù)設(shè)置為2*10^5個 <舉例>)共培養(yǎng)h小時,從培養(yǎng)液中提取分泌蛋白(記為蛋白ⅰ)。

Transwell  1
2.相同培養(yǎng)條件 (培養(yǎng)基含量,細胞數(shù),培養(yǎng)時間,溫度等)設(shè)置兩個Transwell:⑴上層培養(yǎng)細胞A(細胞數(shù)設(shè)置為1*10^5個 <舉例>)下層不放置細胞,⑵上層不放置細胞,下層培養(yǎng)細胞B(細胞數(shù)設(shè)置為2*10^5個 <舉例>),培養(yǎng)h小時,從培養(yǎng)液中提取分泌蛋白(記為蛋白ⅱ)。

Transwell 2-⑴                Transwell 2-⑵
3.質(zhì)譜分析蛋白ⅰ和蛋白ⅱ的差別,初步分析共培養(yǎng)條件下分泌組是否影響。
4.置換細胞A ,細胞B培養(yǎng)的上下層條件,相同方法培養(yǎng)細胞,打質(zhì)譜分析蛋白,分析結(jié)果是否與實驗一有差別,進一步分析原因。

總結(jié):該方法盡可能的同一了共培養(yǎng)和單獨培養(yǎng)的差異,即排除了其他影響條件,只對比在共培養(yǎng)和單獨培養(yǎng)條件下分泌組的變化 ,從而為得到可信數(shù)據(jù)提供了條件,對照分析了在共培養(yǎng)條件下與單獨培養(yǎng)條件下分泌組的變化情況。缺點:由于細胞均未標記,即便結(jié)果顯示共培養(yǎng)和單獨培養(yǎng)分泌組確實有變化,仍無法得出兩種細胞誰影響誰,由此,可利用標記培養(yǎng)基的方法,繼續(xù)優(yōu)化實驗。
實驗二:優(yōu)化設(shè)計,將單獨培養(yǎng)的細胞A培養(yǎng)基用Leud-d標記,細胞B用Lys-C13 標記,而對共同培養(yǎng)的Transwell不做任何標記。如圖所示:
 
Transwell 1
 
Transwell 2-⑴                  Transwell 2-⑵
同實驗一,經(jīng)過相同條件的培養(yǎng),提取分泌組,質(zhì)譜分析(另做A  B細胞上下層交換的實驗),對比單獨培養(yǎng)并分別標記與共培養(yǎng)但不標記條件下分泌組的變化,從而得到兩種細胞在共培養(yǎng)條件下是否影響彼此分泌組的變化,并且可以得出是誰影響誰,還是兩種細胞都有影響。