(一) 實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?
1) 學(xué)習(xí)細(xì)胞傳代知識(shí)
2) 掌握細(xì)胞傳代
3) 進(jìn)行細(xì)胞傳代
 
(二) 方法與材料、
8 s# [& n3 i7 }5 d, R; u1. 所用細(xì)胞：卵巢癌細(xì)胞HO-8910  HO-8910PM 4 Y, z8 k/
2. 試劑：0.25％胰酶、1640培養(yǎng)基（含10％小牛血清） ) e1 C1
3. 儀器和器材：倒置顯微鏡，培養(yǎng)箱、培養(yǎng)瓶、吸管、廢液缸等
 
(三) 步驟、
1. 吸除培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液。
2. 向瓶?jī)?nèi)加入胰蛋白酶和EDTA混合液少許，以能覆滿(mǎn)瓶底為限。
3. 置溫箱中2~5分鐘，當(dāng)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間隙增大后，立即終止消化。
4. 吸除消化液，向瓶?jī)?nèi)注入培養(yǎng)液數(shù)毫升，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶，把殘余消化液沖掉。注意加培養(yǎng)液沖洗細(xì)胞時(shí)，動(dòng)作要輕，以免把已     松動(dòng)的細(xì)胞沖掉流失。
5. 用吸管吸取營(yíng)養(yǎng)液輕輕反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液。
6. 把細(xì)胞懸液吸取部分裝入新培養(yǎng)瓶中，置溫箱中培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)的一般過(guò)程
準(zhǔn)備工作
　　準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無(wú)菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試等;
取材;
在無(wú)菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞（視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ǎ?jīng)過(guò)一定的處理（如消化分散細(xì)胞、分離等）后接入培養(yǎng)器血中，這一過(guò)程稱(chēng)為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無(wú)取材這一過(guò)程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的**培養(yǎng)稱(chēng)為原代培養(yǎng)。理論上講各種動(dòng)物和人體內(nèi)的所有組織都可以用于培養(yǎng)，實(shí)際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個(gè)體的組織容易培養(yǎng)，分化程度低的組織比分化高的容易培養(yǎng)，腫瘤組織比正常組織容易培養(yǎng)。取材后應(yīng)立即處理，盡快培養(yǎng)，因故不能馬上培養(yǎng)時(shí)，可將組織塊切成黃豆般大的小塊，置4℃的培養(yǎng)液中保存。取組織時(shí)應(yīng)嚴(yán)格保持無(wú)菌，同時(shí)也要避免接觸其他的有害物質(zhì)。取病理組織和皮膚及消化道上皮細(xì)胞時(shí)容易帶菌，為減少污染可用抗菌素處理。
培養(yǎng)%
將取得的組織細(xì)胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過(guò)程稱(chēng)為培養(yǎng)。如系組織塊培養(yǎng)，則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部，幾個(gè)小時(shí)后組織塊可貼牢在底部，再加入培養(yǎng)基。如系細(xì)胞培養(yǎng)，一般應(yīng)在接入培養(yǎng)器皿之前進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，按要求以一定的量（以每毫升細(xì)胞數(shù)表示）接入培養(yǎng)器皿并直接加入培養(yǎng)基。細(xì)胞進(jìn)入培養(yǎng)器皿后，立即放入培養(yǎng)箱中，使細(xì)胞盡早進(jìn)入生長(zhǎng)狀態(tài)。
正在培養(yǎng)中的細(xì)胞應(yīng)每隔一定時(shí)間觀察一次，觀察的內(nèi)容包括細(xì)胞是否生長(zhǎng)良好，形態(tài)是否正常，有無(wú)污染，培養(yǎng)基的PH 是否太酸或太堿（由酚紅指示劑指示），此外對(duì)培養(yǎng)溫度和CO2 濃度也要定時(shí)檢查。
一般原代培養(yǎng)進(jìn)入培養(yǎng)后有一段潛伏期（數(shù)小時(shí)到數(shù)十天不等），在潛伏期細(xì)胞一般不分裂，但可貼壁和游走。過(guò)了潛伏期后細(xì)胞進(jìn)入旺盛的分裂生長(zhǎng)期。細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)瓶底后要進(jìn)行傳代培養(yǎng)，將一瓶中的細(xì)胞消化懸浮后分**兩到三瓶繼續(xù)培養(yǎng)。每傳代一次稱(chēng)為“一代”。二倍體細(xì)胞一般只能傳幾十代，而轉(zhuǎn)化細(xì)胞系或細(xì)胞株則可無(wú)限地傳代下去。轉(zhuǎn)化細(xì)胞可能具有惡性性質(zhì)，也可能僅有不死性（Immortality）而無(wú)惡性。培養(yǎng)正在生長(zhǎng)中的細(xì)胞是進(jìn)行各種生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)的良好材料。
凍存及復(fù)蘇;
為了保存細(xì)胞，特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株，要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度－196℃，將細(xì)胞收集**凍存管中加入含保護(hù)劑（一般為二甲亞砜或甘油）的培養(yǎng)基，以一定的冷卻速度凍存，**終保存于液氮中。在極低的溫度下，細(xì)胞保存的時(shí)間幾乎是無(wú)限的。
復(fù)蘇一般采用快融方法，即從液氮中取出凍存管后，立即放入37℃水中，使之在一分鐘內(nèi)迅速融解。然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進(jìn)行培養(yǎng)。
凍存過(guò)程中保護(hù)劑的選用、細(xì)胞密度、降溫速度及復(fù)蘇時(shí)溫度、融化速度等都對(duì)細(xì)胞活力有影響。
 
(四) 結(jié)果、
細(xì)胞傳代培養(yǎng)照片如下：
 
圖 一：放大100倍下細(xì)胞照片
 
 
 
圖 二 ：放大200倍下細(xì)胞照片
(五) 總結(jié)
 這次實(shí)驗(yàn)讓我們熟悉了無(wú)菌操作和傳代培養(yǎng)的方法和步驟，也熟悉了各種實(shí)驗(yàn)儀器的使用。**次作細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，對(duì)各種方法和步驟都不熟悉，但是在老師的指導(dǎo)下**后實(shí)驗(yàn)基本成功，也看到了自己傳代的癌細(xì)胞，還是欣慰的。